上海遠慕生物現(xiàn)貨供應【進口 國產(chǎn)】ELISA試劑盒，詳細講述大鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒的操作流程，信息說明，注意事項及其他咨訊，本司所供應的ELISA試劑盒品種齊全，包含大鼠，小鼠，人，馬，猴，魚，鴨，雞，兔，植物，狗，豬，羊，植物，豚鼠及其他種屬等，價格實惠，歡迎訂購!
大鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒操作流程
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【信息說明】
中文名：大鼠降鈣素(CT)ELISA試劑盒
別名：大鼠降鈣素(CT)ELISA Kit
供應商：上海遠慕
規(guī)格：48t/96t
保存：2~8℃
有效期：6個月
樣本：血清、血漿、細胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
特點：敏感性高、特異性強、重復性好、試劑穩(wěn)定、易保存，操作簡便。
用途：用于測定血清，血漿及相關液體樣本中相關含量或活性。
種屬：人、大鼠、小鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛、羊、雞、鴨、魚等。
檢測原理：采用雙抗體夾心ABC-ELISA法。
【樣本收集保存】
1、血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2、血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。
3、細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4、組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。
5、保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
【操作流程】
1、待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl，每種樣品設3個平行孔;設兩個陰性對照孔，每孔加未處理組的細胞裂解液100μl;另設一個空白對照孔，加入純細胞裂解液100μl。
2、酶標板置4℃，包被過夜。
3、洗板：吸干孔內(nèi)反應液，用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔后，即甩去)，之后將洗滌液注滿板孔，浸泡1-2分鐘，間歇搖動。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙上拍干。重復洗滌3-4次。
4、陰性對照孔每孔加入PBS 50μl，樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
5、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
6、洗板，同(4)。
7、每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
8、酶標板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi)，孵育60min。
9、洗板，同(4)。
10、每孔加TMB顯色液 100μl，輕輕混勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
11、每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應。
12、分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，終測得的OD值為兩者之差(W1-W2)，以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
13、數(shù)據(jù)處理：在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值后，計算S/N值。S/N≥2.1為陽性判定標準。
【注意事項】
1、不同廠家生產(chǎn)的試劑盒因生產(chǎn)工藝和操作方法略有不同，務必按照所用試劑盒嚴格操作，否則容易產(chǎn)生檢測結果的不確定性.
2、若不同批號人ELISA試劑盒的不同組分(A液或酶工作液)，或不同試劑的不同組分進行交叉使用，有可能出現(xiàn)顯色淺或本底高，花板等情形。
3、反應時間的誤差，做大量標本時，一孔和后一孔以及一些特殊標本可能影響較大。
4、臨界值附近標本波動為正?，F(xiàn)象，任何試劑均不可避免?？梢钥紤]將標本做奇數(shù)次復檢。
5、加樣時樣品量誤差，對于陰或很陽的標本影響不大，但對閾值附近的標本影響極大，建議校對加樣器。
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