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感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法有哪些嗎?
點(diǎn)擊次數(shù):1198 更新時(shí)間:2018-08-28

      DH的感受態(tài)是指細(xì)胞經(jīng)過(guò)一些特殊方法(電擊法、CaCl2法等處理后,細(xì)胞膜的通透性發(fā)生了暫時(shí)性的改變,成為能允許外源DNA分子進(jìn)入的細(xì)胞,即感受態(tài)細(xì)胞(Compenent cells).那么,感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞轉(zhuǎn)化方法有哪些嗎?下面就有小編來(lái)為您詳細(xì)介紹一下吧!

1.制冰盒一個(gè),打開凈化工作臺(tái)電源,使其處于工作狀態(tài),以下操作除孵育、振蕩菌液外,其余均需在凈化工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行。

2.從-80℃冰箱中取出“感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞”一支,“試劑A”,從-20℃冰箱中取出無(wú)菌雙蒸水一支和待轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒DNA一支,均置冰盒內(nèi)。

3.取消毒1.5 ml Eppendorf管一支,用移液器將待轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA 1ul、“試劑A”20 ul、無(wú)菌雙蒸水80 ul,分別吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內(nèi)混勻,冰上備用。將感受態(tài)DH細(xì)菌細(xì)胞80-100 ul吸入消毒1.5 ml Eppendorf管內(nèi)混勻,冰浴20分鐘。隨后,室溫放置10分鐘。

4.在1.5 ml Eppendorf管內(nèi)加入400ul LB液體培養(yǎng)基,37℃,200rpm振蕩10-40分鐘。

5.隨后取100-600 ul鋪平板,于37℃溫箱培養(yǎng)12-16小時(shí)。 

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