遠慕課堂又來啦！
這一次干貨滿滿喲，
快來看看ELISA在生物藥研發(fā)中的直接法實驗方案吧！

ELISA定量方法的類型和構架
采用ELISA技術進行定量的平臺化方法——一般來說可以分為兩類，即間接法和直接法。

間接法也稱為競爭法，直接法也稱雙抗夾心法。

今天，我們重點為大家介紹直接法。

直接法以定量抗原為例：

首先，以與抗原有強親和力的抗體包被固定在酶標板材上，加入抗原標準品/樣品反應，再加入與抗原有強親和力的抗體并且偶聯(lián)了辣根過氧化氫酶HRP/堿性磷酸酶AP的酶聯(lián)抗體反應，后加入酶對應的底物顯色，中間通過洗滌去除反應體系中未結上的試劑成分。

這樣信號大小和抗原的濃度成正相關，隨著反應的進行酶標板材上固定的成分由抗體，轉(zhuǎn)變?yōu)榭贵w-抗原，后變?yōu)榭贵w-抗原-酶聯(lián)抗體，待測的抗原處于兩個抗體之間，所以也稱為雙抗夾心法。

雙抗夾心法有一個關鍵點：待檢測的物質(zhì)（如抗原）必須給包被抗體和酶聯(lián)抗體提供兩個結合位點，這兩個位點可以是抗原上兩個以上相同的結構位點，也可以是不同的結構位點。

一般來說，Elisa的構架由標準品，內(nèi)控品，空白對照，基質(zhì)對照和待測樣品組成。
 

 標準品 

根據(jù)實驗的具體應用方向來源，標準品可以是已知濃度的/國家標準品或者商業(yè)化的已知濃度的蛋白分子，也可以是自制的以其他方式定量（如紫外吸收定量）的純度較高的蛋白分子。標準品一般為7-8個濃度點，擬合成合適的濃度-信號劑量曲線作為標準曲線進行內(nèi)控品和樣品的定量。

 內(nèi)控品 

其中，內(nèi)控品是能夠長期使用的、獨立分裝的、特定濃度（高中低）的標準品，是監(jiān)控ELISA實驗在單次實驗中的質(zhì)量和長期的應用過程中不同批次標準品的過渡橋接。

 空白對照 

空白對照為不含標準品的標準品溶液，基質(zhì)對照則為不含樣品的樣品溶液——兩者可能是一樣的成分，也可能是不同的成分，需要根據(jù)實驗的具體情況進行區(qū)分，目的是確認ELISA體系中是否有非特異的交叉反應。