生化試劑（Biochemical reagent）是指有關(guān)生命科學(xué)研究的生物材料或有機(jī)化合物，以及臨床診斷、醫(yī)學(xué)研究用的試劑。

生化試劑在應(yīng)用的過程中，常常會出現(xiàn)一些異常情況，下面我們就來分析下常見的問題：

1、試劑空白

試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標(biāo)之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍，試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì)；如利用Trinder反應(yīng)為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質(zhì)分解出酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負(fù)反應(yīng)，在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上，吸光度上升的反應(yīng)，其試劑空白吸光度越低越好，不能超過一個高限；相反，吸光度下降的反應(yīng)，其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此，試劑空白吸光度限值，常作為程序參數(shù)輸入儀器，如經(jīng)核查超限，儀器會自動報警，提示更換試劑。需要指出的是，還原型輔酶I(或II)等投料量不足或劣質(zhì)的原料，往往需要加大用量，才使“表觀”吸光度上升，湊合過試劑空白核對的“關(guān)”，其后果為如下情況：

1．1 線性范圍變窄現(xiàn)象：高值測不高。原因：生產(chǎn)試劑時有效成分投料量不足；試劑成份穩(wěn)定性較差。

1．2 靈敏度變低現(xiàn)象：酶促反應(yīng)速度曲線斜率下降，測定結(jié)果有嚴(yán)重系統(tǒng)誤差。原因：試劑底物濃度不足。

1．3 低值偏高 現(xiàn)象：試劑空白的變化曲線(吸光度VS時間)明顯波動。原因：試劑自身不穩(wěn)定，自行分解；工具酶純度不夠，雜酶含量超限，導(dǎo)致干擾作用。

2、樣品信息

樣品的溶血、脂血、黃疸等會對測定結(jié)果產(chǎn)生非化學(xué)反應(yīng)的干擾。因此，應(yīng)根據(jù)溶血、脂濁、黃疸的光譜吸收特性，采用雙波長或多波長的檢測模式，并在結(jié)果計算中扣除因溶血、脂血、黃疸引起的影響，減少干擾程度。

3、測定范圍

每種待測物都有一個可測定的濃度或活性范圍，樣品結(jié)果若超過此范圍，分析儀將顯示結(jié)果超過范圍的提示。表示試劑已經(jīng)變質(zhì)，應(yīng)更換合格試劑。

4、底物耗盡

使用連續(xù)監(jiān)測法、兩點法測定酶活性時，若酶活性非常高，底物接近被耗盡，吸光度上升或下降會超過某一吸光度變化范圍，監(jiān)測期的吸光度將偏離線性，使測定結(jié)果不可靠。

5、酶的預(yù)活化

測定血清中的某些酶，如CK，離體(采血)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新激活。如CK—NAC試劑盒即含有CK活化劑，名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研究證明，NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。

6、校準(zhǔn)與結(jié)果溯源性

酶的校正：要滿足在同一方法學(xué)、同一測定條件、與理論計算的FACTOR值差異不大，沒有發(fā)現(xiàn)有明顯影響因素，方可進(jìn)行校正。

檢驗結(jié)果溯源性，得建立一個可靠的參考系統(tǒng)作為準(zhǔn)確性基礎(chǔ)，然后將準(zhǔn)確性轉(zhuǎn)移到常規(guī)方法測定中去，使常規(guī)方法測定結(jié)果可溯源到參考系統(tǒng)所提供的準(zhǔn)確性基礎(chǔ)上來。在實現(xiàn)溯源性目標(biāo)過程中，永遠(yuǎn)以患者新鮮標(biāo)本為實驗對象，以方法學(xué)對比試驗方法為驗證手段。

臨床化學(xué)中參考標(biāo)準(zhǔn)(二級標(biāo)準(zhǔn))要有通用性，但生產(chǎn)廠家提供的校準(zhǔn)液并非通用的，只適用于某一特定的分析系統(tǒng)。

校準(zhǔn)液標(biāo)示值往往是按其基質(zhì)偏差修正的，所以標(biāo)示值并非實際值。校準(zhǔn)液、質(zhì)控血清通常是經(jīng)過處理的混合人或動物血清，這種制備物在特定分析系統(tǒng)中往往與人新鮮血清反應(yīng)性不同而產(chǎn)生基質(zhì)偏差。如總膽固醇測定基質(zhì)效應(yīng)研究指出：校準(zhǔn)液酶法測定回收結(jié)果偏低可達(dá)5%~7%。

7、試劑抗干擾作用的合理性有些液體雙試劑，其實質(zhì)并不真正具備抗干擾的能力而只是解決了試劑的液體化和穩(wěn)定性問題。Vc干擾必須同時具備二個條件：a)Vc攝入量較多；b)采血后立即測定。實驗表明離體血清中Vc在90 min后會全部被氧化。甘油三酯測定，有人主張選用雙試劑方法消除內(nèi)源性甘油，這個方法是可行的，但忽視了一個化學(xué)平衡理論。因為所有的酯在水溶液中都不是簡單地以酯的形式存在，而是以水解與酯化相平衡的形式存在。在一個平衡體系中，如果去除游離甘油，這個平衡就向生成甘油方向移動，甘油三酯就會重新水解，生成新的甘油，達(dá)到新的平衡，因此樣品與R1試劑孵育時間越長，測得甘油三酯值就越低。甘油三酯測定，不僅要去除游離甘油，而且還要克服樣本含量真實性發(fā)生的變化，試劑中必須加入甘油激酶，并且延遲時間要標(biāo)準(zhǔn)化。所以，一些試驗項目在消除內(nèi)源性物質(zhì)干擾的同時，會帶來樣品含量真實性的變化。