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紫外吸收法定量蛋白質(zhì)的優(yōu)缺點介紹
點擊次數(shù):938 更新時間:2024-01-05

1.蛋白質(zhì)測定的Folin-酚比色法(即Lowry法)的定量范圍為5~100μg蛋白質(zhì),靈敏度高;但操作要費較長時間,且Folin試劑顯色反應由酪an酸、色an酸和半胱氨氨酸引起,因此樣品中若含有酚類、檸檬酸和巰基化合物均有干擾作用;不同蛋白質(zhì)因酪an酸、色an酸含量不同而使顯色強度也稍有不同。 紫外吸收法測蛋白質(zhì)含量迅速、簡便、不消耗樣品,低濃度鹽類不干擾測定。因此,已在蛋白質(zhì)和酶的生化制備中廣泛采用,尤其在柱層析分離純化中,常用280nm進行紫外檢測,來判斷蛋白質(zhì)吸附或洗脫情況。

但該法的缺點是:

(1)對于測定那些與標準蛋白質(zhì)中酪an氨酸和色an酸含量差異較大的蛋白質(zhì),有一定的誤差。故該法適于測定與標準蛋白質(zhì)氨基酸組成相似的蛋白質(zhì)。

(2)若樣品中含有嘌呤、嘧啶等吸收紫外光的物質(zhì),會出現(xiàn)較大干擾。例如,在制備酶的過程中,層析柱的流出液中有時混雜有核酸,應予以校正

2.當樣品中含有核酸類雜質(zhì),可以根據(jù)核酸在260nm波長處有最qiang的紫外光吸收,而蛋白質(zhì)在280nm處有最大的紫外光吸收的性質(zhì),通過計算可以適當校正核酸對于測定蛋白質(zhì)濃度的干擾作用。但是,因為不同的蛋白質(zhì)和核酸的紫外吸收是不相同的,雖然經(jīng)過校正,測定結(jié)果還存在著一定的誤差

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