菌種提純復(fù)壯的幾個主要方法

1、純種分離法

通過純種分離，可將衰退菌種細(xì)胞群體中一部分仍保持原有典型性狀的單細(xì)胞分離出來，經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)，就可恢復(fù)原菌株的典型性狀。常用的分離純化的方法可歸納成兩類：一類較粗放，只能達(dá)到“菌落純”的水平，即從種的水平來說是純的。例如采用稀釋平板法、涂布平板法、平板劃線法等方法獲得單菌落。另一類是較精細(xì)的單細(xì)胞或單孢子分離方法。它可以達(dá)到“細(xì)胞純”即“菌株純”的水平。后一類方法應(yīng)用較廣，種類很多，既有簡單的利用培養(yǎng)皿或凹玻片等作分離室的方法，也有利用復(fù)雜的顯微操縱器的純種分離方法。對于不長孢子的絲狀菌，則可用無菌小刀切取菌落邊緣的菌絲尖jian端進(jìn)行分離移植，也可用無菌毛細(xì)管截取菌絲尖jian端單細(xì)胞進(jìn)行純種分離。

2、宿主體內(nèi)復(fù)壯法

對于寄生性微生物的衰退菌株，可通過接種到相應(yīng)昆蟲或動植物宿主體內(nèi)來提高菌株的毒性。例如蘇云金芽孢桿菌經(jīng)過長期人工培養(yǎng)會發(fā)生毒力減退、殺蟲率降低等現(xiàn)象，可用退化的菌株去感染菜青蟲的幼蟲，然后再從病死的蟲體內(nèi)重新分離典型菌株。如此反復(fù)多次，就可提高菌株的殺蟲率。根瘤菌屬經(jīng)人工移接，結(jié)瘤固氮能力減退，將其回接到相應(yīng)豆科宿主植物上，令其侵染結(jié)瘤，再從根瘤中分離出根瘤菌，其結(jié)瘤固氮性能就可恢復(fù)甚至提高。

3、淘汰法

將衰退菌種進(jìn)行一定的處理(如藥物，低溫、高溫等)，往往可以起到淘汰已衰退個體而達(dá)到復(fù)壯的目的。如有人曾將大菱鲆胃腸道內(nèi)提取的芽孢桿菌的分生孢子在低溫(-10℃～  -30℃ )下處理5～7 d，使其死亡率達(dá)到80％，結(jié)果發(fā)現(xiàn)在抗低溫的存活個體中留下了未退化的健壯個體。

4、遺傳育種法

即把退化的菌種，重新進(jìn)行遺傳育種，從中再選出高產(chǎn)而不易退化的穩(wěn)定性較好的生產(chǎn)菌種。