當(dāng)您選擇抗體時(shí)，一些有用的建議如下:

通過(guò)查閱文獻(xiàn)，查找使用過(guò)類(lèi)似抗體的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行咨詢(xún)；

詢(xún)問(wèn)其他實(shí)驗(yàn)室成員是否已經(jīng)用過(guò)了適合您實(shí)驗(yàn)的抗體；

檢查抗體的克隆性、應(yīng)用適應(yīng)性、宿主物種和種屬反應(yīng)性等各種數(shù)據(jù)。

查看供應(yīng)商提供的圖片和數(shù)據(jù)——數(shù)據(jù)是否可信、實(shí)驗(yàn)結(jié)果優(yōu)劣鑒定？

參考引用該抗體的任何論文和論文中數(shù)據(jù)的表現(xiàn)選擇適合自己的抗體。

一抗選擇

01 確認(rèn)研究用途

研究主題是什么？

抗體的克隆性質(zhì)？

02 抗體的種屬？

樣本的種屬來(lái)源需要和抗體的種屬來(lái)源不同。像western blot這樣的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，樣本是沒(méi)有內(nèi)源性免疫球蛋白(IgG)的細(xì)胞裂解液，或者使用直標(biāo)一抗的實(shí)驗(yàn)應(yīng)用，都不用擔(dān)心這個(gè)問(wèn)題。

如果不得不需要使用和樣本種屬來(lái)源相同的抗體 (如鼠抗鼠的抗體)，建議進(jìn)行抗體定制服務(wù)。

03 非模式生物

如果研究對(duì)象為非模式生物，并且不得不要用一種在該物種中沒(méi)有被測(cè)試過(guò)的抗體。當(dāng)然很可能無(wú)法得到理想的結(jié)果，但是大部分的保守序列蛋白質(zhì)是可以被一個(gè)未經(jīng)驗(yàn)證的抗體識(shí)別的。

因此，如果沒(méi)有很好地選擇，一般建議選擇對(duì)目標(biāo)生物的該蛋白進(jìn)行序列比對(duì)，并且得出該蛋白序列是否足夠保守的結(jié)果。（Swiss-Prot蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)鏈接中可以找到所需的序列，還有一些網(wǎng)站提供計(jì)算相似度的工具，例如多序列比對(duì)工具CLUSTALW.）

將抗體的免疫原序列與您想檢測(cè)的物種的蛋白序列進(jìn)行比對(duì)，如果重合比對(duì)結(jié)果重復(fù)度大于85%，那么兩者可能會(huì)發(fā)生交叉反應(yīng)效應(yīng)（即使是比對(duì)得分大于85%，也無(wú)法*保證抗體一定會(huì)識(shí)別）需要使用多個(gè)對(duì)照來(lái)確定該抗體是按您預(yù)期與靶標(biāo)特異地結(jié)合。

關(guān)于二抗選取的幾個(gè)建議：

選擇蕞亮的熒光素來(lái)標(biāo)記表達(dá)量蕞低的蛋白質(zhì)

當(dāng)您使用多色標(biāo)記時(shí)，所有二抗應(yīng)該保持物種來(lái)源一致

如果您在實(shí)驗(yàn)前用來(lái)自和二抗同一宿主物種的血清來(lái)封閉樣本，這將顯著降低背景

預(yù)吸附二抗 對(duì)于多色分析很有用，可確保較低的物種間交叉反應(yīng)性

片段抗體 更小且可高效得滲入組織（對(duì)IHC很有用）

生物素偶聯(lián)物可檢測(cè)低豐度蛋白