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微生物營養(yǎng)和環(huán)境條件實驗
點擊次數(shù):595 更新時間:2021-06-16

實驗材料

1、活材料:培養(yǎng)3d的黑曲霉(Aspergillus niger)、根瘤菌(Rhizobium sp.)、培養(yǎng)24h的大腸桿菌(E. coli)、巴斯德梭菌(Clostridium pasteurianum)、枯草桿菌(Bacillus subtilis)、培養(yǎng)5d的吸水鏈霉菌“5102”(Sterptomyces hygroscopicus “5102”)、培養(yǎng)24~48h的金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)及黏質(zhì)沙雷氏菌(Serratia marcescens)的斜面菌種;其它自選的微生物材料,包括實驗室已有的和自己從環(huán)境中分離得到的均可。

2、培養(yǎng)基:原則上可以參考以下培養(yǎng)基:完-全培養(yǎng)基、缺C培養(yǎng)基、缺N培養(yǎng)基、缺P培養(yǎng)基、缺K培養(yǎng)基、缺Zn培養(yǎng)基、葡萄糖牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基(含瓊脂10g/L,每管12 mL)、牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)基、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液、牛肉膏蛋白胨瓊脂培養(yǎng)基;也可以自己選定其它合適的培養(yǎng)基。

3、試劑: 0.2mol/L K2HPO4、0.2mol/L硼酸、0.2mol/L NaOH、0.1mol/L檸檬酸;1g/L HgCl2,200??g/L鏈霉素,200??g/L青霉素,50g/L石炭酸;或者其它合適的試劑。

實驗用品

接種環(huán)、酒精燈、9 mL無菌水、1 mL無菌吸管、無菌水、無菌平皿、玻璃刮鏟、滅菌五角星形圖案紙(牛皮紙或黑紙)、紫外燈箱、無菌鑷子、直徑0.6cm的無菌圓形濾紙片;或其它實驗用品。

實驗設(shè)計方案的基本要求

本實驗是在已經(jīng)做了微生物的一些基本實驗和綜合實驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行的,實驗設(shè)計方案中應(yīng)簡明地闡述實驗?zāi)康?、原理、材料、實驗方法、觀測結(jié)果以及結(jié)果分析等內(nèi)容。

(一)擬訂實驗?zāi)康?/p>

實驗?zāi)康膽?yīng)該寫明:通過何種設(shè)計方案,采用哪種方法,說明哪些因素對微生物生長有影響,影響程度如何;從本次實驗本人可以獲得哪些收獲等等。

(二)確定實驗原理

對自己的實驗設(shè)計方案、方法從理論上說明依據(jù)。如微生物生長需要哪些營養(yǎng)物質(zhì),包括有機物、礦質(zhì)營養(yǎng)元素;微生物與氧氣的關(guān)系;微生物的生長溫度范圍;微生物生長繁殖需要的酸堿度即pH值環(huán)境;紫外線對微生物的作用;化學(xué)藥劑對微生物的生長抑制或殺死作用等等,應(yīng)根據(jù)試驗?zāi)康撵`活選擇。

(三)確定實驗材料

實驗材料應(yīng)根據(jù)自己的實驗?zāi)康膩泶_定,可以是實驗室已有的活菌種,也可以是自己從環(huán)境中分離得到的微生物材料。

(四)設(shè)計實驗方法

實驗方法的確定也應(yīng)該根據(jù)實驗?zāi)康倪M(jìn)行。應(yīng)該包括菌種的選擇、配制何種培養(yǎng)基、需要哪些器材和藥品、怎樣接種、怎樣培養(yǎng)、怎樣觀察結(jié)果等等。

可供參考的實驗方法如下:

1、營養(yǎng)元素對黑曲霉生長的影響

⑴制備培養(yǎng)基:本實驗分組配制培養(yǎng)基,培養(yǎng)基配方見附錄1-8。培養(yǎng)基分裝試管,每管裝量4~5mL,0.1MPa滅菌30min后備用。

⑵孢子懸液制備:取無菌水1支,用接種環(huán)從黑曲霉斜面菌種管中挑取菌體2~3環(huán),放入水中,充分混勻,備用。

⑶接種:每人取完-全、缺C、缺N、缺P、缺K和缺Zn培養(yǎng)液各一支,用1 mL無菌吸管按無菌操作法接種黑曲霉孢子懸液0.5 mL。本實驗按每4人取一套培養(yǎng)基不接種作為對照。

⑷觀察:接種后,將培養(yǎng)管置28℃溫度下培養(yǎng)5~7d ,觀察黑曲霉菌絲及孢子生長情況?!镌撛囼炗眉?xì)菌類微生物作試驗菌種能觀察到明顯的結(jié)果嗎?為什么?

2、氧氣對微生物生長的影響

⑴菌懸液制備:用接種環(huán)按無菌操作法取根瘤菌、巴斯德梭菌、大腸桿菌1~2環(huán)分別放入三支無菌水中制成菌懸液。

⑵接種:取已熔化并保溫在50℃左右的培養(yǎng)基6支,用無菌吸管分別及取菌懸液0.2 mL接種到培養(yǎng)管中,每種試驗菌接種2個重復(fù),接種后立即置振蕩器上混勻,并冷凝。

⑶培養(yǎng):置培養(yǎng)管于28~30℃下培養(yǎng)3d。

⑷結(jié)果檢查:取出培養(yǎng)管,觀察并記錄每支培養(yǎng)管的上、中、下各層次中細(xì)菌的菌苔大小,菌體集中分布的位置,以了解氧氣對幾種細(xì)菌生長的影響。

3、溫度對微生物生長的影響

⑴接種:取牛肉膏蛋白胨瓊脂斜面培養(yǎng)基8支,用接種環(huán)按無菌操作法分別在斜面上劃線接種大腸桿菌與枯草桿菌,勿劃破培養(yǎng)基。

⑵培養(yǎng):將已接種的斜面培養(yǎng)基,分別放在4℃、28℃、37℃和45℃四種溫度下培養(yǎng)。

⑶觀察:培養(yǎng)48h、72h后觀察生長狀況,根據(jù)菌苔的大小確定其生長最適溫度。

4、氫離子濃度對微生物生長的影響

⑴培養(yǎng)基制備:分組按下列配方配制不同pH值的培養(yǎng)基,并用pH計校證pH值,然后分裝入試管中,每管裝量5~6 mL,0.1Mpa滅菌30min備用,見表。

⑵接種培養(yǎng):取供試pH培養(yǎng)基三組用接種環(huán)按無菌操作法于試管中分別接入大腸桿菌、吸水鏈霉菌、黑曲霉。在37℃下培養(yǎng)48h。

⑶檢查結(jié)果:出取培養(yǎng)物,觀察并記錄實驗結(jié)果。

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