泛素化（Ubiquitination）?是一種蛋白質(zhì)翻譯后修飾過程，涉及泛素分子在一系列酶的作用下共價結(jié)合到靶蛋白上。泛素化在細胞內(nèi)具有多種功能，包括蛋白質(zhì)降解、信號傳導、DNA修復和細胞周期調(diào)控等。?

定義和過程

泛素化是指泛素分子在一系列酶的作用下共價結(jié)合到靶蛋白上的過程。這個過程涉及三種關鍵酶：E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶和E3泛素連接酶。首先，E1在ATP供能下激活泛素分子，然后將其轉(zhuǎn)移到E2上，最后E3識別并結(jié)合特定的底物蛋白，催化泛素從E2轉(zhuǎn)移到底物蛋白的賴氨酸殘基上，形成異肽鍵，完成泛素化修飾。

生物學功能

泛素化在細胞內(nèi)具有多種功能：

?蛋白質(zhì)降解?：通過蛋白酶體途徑降解異常或多余的蛋白質(zhì)，維持細胞的穩(wěn)態(tài)。

?信號傳導?：參與多種細胞信號通路的調(diào)節(jié)，如NF-κB信號通路等。

?DNA修復?：在DNA損傷時，通過泛素化修飾相關蛋白來啟動DNA修復機制。

?細胞周期調(diào)控?：影響細胞周期的進程，確保細胞的正常分裂和增殖。

檢測方法

檢測蛋白是否泛素化的方法包括：

?免疫沉淀結(jié)合Western Blot分析?：通過免疫共沉淀的方法將特定蛋白及其結(jié)合的其他蛋白分離出來，進行SDS電泳和Western Blot分析。

?Western Blot結(jié)合膜剝離技術?：通過Western Blot分析所有可能的泛素化蛋白條帶，并進行膜剝離處理。

?體外泛素結(jié)合檢測?：將目標蛋白基因轉(zhuǎn)染至細胞中，通過大量表達和提純目的蛋白進行分析。

?體外泛素化反應分析?：將目的基因轉(zhuǎn)染至細胞中，使其大量表達，然后進行免疫沉淀和Western Blot分析。